人乳腺成纖維細胞是乳腺組織微環境中的關鍵間質細胞，參與乳腺發育、組織修復及腫瘤微環境調控。人乳腺成纖維細胞試劑盒為科研人員提供了原代細胞株、專用培養基與配套試劑，大大簡化了細胞培養流程，成為乳腺生物學、腫瘤研究與藥物篩選的重要工具。
第一步：準備工作與環境消毒
在生物安全柜內操作，提前開啟紫外燈照射30分鐘。實驗人員需穿戴無菌手套、實驗服與口罩。將水浴鍋預熱至37℃，CO2培養箱設定為37℃、5%CO2、飽和濕度。檢查試劑盒內各組分是否齊全、未過期。
第二步：細胞復蘇與接種
從液氮罐中取出凍存管，立即放入37℃水浴中快速搖晃融化（1-2分鐘），避免冰晶緩慢解凍損傷細胞。用75%酒精消毒管壁，轉入生物安全柜。將細胞懸液緩慢轉移至含5-10mL預熱培養基的離心管中，1000rpm離心5分鐘，棄上清。用新培養基重懸細胞，接種于預先包被的T25或T75培養瓶中，輕輕混勻后放入培養箱。
第三步：培養基配制與更換
試劑盒通常提供基礎培養基與專用添加劑（如生長因子、血清、抗生素）。按說明書比例無菌混合，配制成培養基，4℃避光保存，建議2周內用完。細胞貼壁后（約24小時），換液去除殘留DMSO；此后每2-3天更換一次培養基，觀察細胞形態與密度。
第四步：細胞傳代與擴增
當細胞融合度達80%-90%時進行傳代。棄培養基，用無菌PBS輕柔洗滌一次。加入適量胰酶-EDTA溶液，37℃孵育1-3分鐘，顯微鏡下觀察細胞變圓、脫落。加入含血清培養基終止消化，吹打均勻，按1:2至1:4比例傳代至新培養瓶。
第五步：細胞凍存與長期保存
選取對數生長期細胞，按上述方法消化、離心。用細胞凍存液（含90%培養基+10%DMSO）重懸，按1mL/管分裝至凍存管。采用程序降溫盒（-1℃/min）或梯度降溫法，于-80℃過夜后轉入液氮長期保存。
第六步：質量監控與污染防范
每日觀察細胞形態（應呈長梭形、成纖維細胞典型特征）、生長狀態及有無微生物污染（渾濁、pH變化）。定期檢測細胞活力（臺盼藍染色）與支原體污染。
服務熱線：400-8822-003
更新時間：2025-10-16
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